Synthèse peptidique difficile et hydrophobe

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Séquence peptidique trop hydrophobe ? Se regrouper facilement ? Plusieurs paires de liaisons disulfure ? Science-Les services de synthèse peptidique difficile et de synthèse peptidique hydrophobe de Peptide sont spécialisés dans toutes sortes d'années d'expérience "impossible". 20, systèmes de solvants spéciaux, livraison stable. N'hésitez pas à nous contacter.

Quels types de peptides sont considérés comme « difficiles » ?
Travaillant dans le secteur de la synthèse peptidique depuis 20 ans, j'ai vu toutes sortes de peptides difficiles. Lorsque les clients nous contactent, ils ont déjà interrogé plusieurs entreprises, et la réponse qu'ils obtiennent est soit "Je ne peux pas le faire", soit "Essayez-le, sans garantie".

Peptide à forte hydrophobie : région transmembranaire, peptide signal, acide aminé hydrophobe, une fois synthétisé, il sera agglutiné sur la résine, et l'acide aminé derrière lui ne pourra pas entrer.
Les peptides qui s'agrègent facilement, tels que les peptides amyloïdes et antimicrobiens, s'accumulent lors de leur synthèse et obstruent la colonne lorsqu'ils sont purifiés.
Peptides avec plusieurs paires de liaisons disulfure : plus de trois paires, un faux pas dans l'ordre d'appariement et la molécule entière est ruinée.
Peptide long : plus de 60 acides aminés, chaque étape du rendement diminue, et au final il ne reste plus rien.
Combinaison complexe de modifications : phosphorylation, fluorescence, cyclisation et conditions qui s'opposent.
Nous pouvons tous les prendre, et il ne s'agit pas d'« essayer », mais d'« avoir un plan ».

1. Peptides hydrophobes : avec des systèmes de solvants spécialisés
La difficulté des peptides hydrophobes réside dans le fait qu’ils ne peuvent pas être dissous dans les solvants conventionnels et qu’une fois synthétisés, la chaîne peptidique « s’agglutine » sur la résine, rendant impossible l’entrée des acides aminés situés derrière elle.

Notre solution :
Combinaison de solvants spéciaux : système mixte DMF, NMP, DCM, plus un peu d'agent de démoulage liquide, de sorte que la chaîne peptidique reste tendue.
Optimisation de la température : certaines réactions sont meilleures à 40 degrés qu'à température ambiante, certaines doivent être abaissées jusqu'à 0 degré, nous les avons essayées une à une.
Sélection de la résine : utilisez une résine à haute solubilité pour les peptides hydrophobes afin de laisser suffisamment d'espace pour les chaînes peptidiques.
Etiquettes solubilisées : Si vous ne pouvez pas, ajoutez une étiquette hydrophile et coupez-la après synthèse.

Cas réel : un peptide transmembranaire 35aa, les acides aminés hydrophobes représentaient 70 %, le client a recherché trois sociétés ne peut pas être fait. Nous avons changé le système de solvants et ajouté une étiquette solubilisante. Finalement, la pureté était de 92 % et le client a réalisé l'étude de structure en douceur.

2. Plusieurs paires de liaisons disulfure : pas de chance, stratégie
Plus il y a de liaisons disulfure, plus il est difficile de les appairer. Deux paires, c'est bien, mais trois paires ou plus, et un faux pas et c'est fini.
Notre stratégie :
Protection orthogonale : Cys peut être ouvert et associé par étapes en utilisant différents groupes protecteurs, tels que Trt, Acm, tBu.
Optimisation des conditions d'oxydation : oxydation à l'air, oxydation du glutathion, oxydation de l'iode, différentes méthodes pour différents peptides.
QC intermédiaire : après chaque paire, prélevez un échantillon pour MS et confirmez l’appariement avant de continuer.
Confirmation MS/MS (facultatif) : rupture finale-avec spectrométrie de masse secondaire pour voir où les liaisons disulfure sont réellement attachées.

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >Une pureté de 90 %, des liaisons disulfure correctement appariées et la structure cristalline a ensuite été résolue par le client.

3. Peptides sujets à l'agrégation : synthétiser tout en se défendant
Certains peptides aiment naturellement s’agréger, comme la protéine amyloïde et le peptide antibactérien. Ils commencent à s'agréger lorsqu'ils sont synthétisés, bloquent la colonne lorsqu'ils sont purifiés et ne peuvent se dissoudre lorsqu'ils sont en main.
Notre solution :
Pseudoproline : la pseudoproline est introduite en position Ser/Thr pour perturber la tendance à l'agrégation et revenir après la synthèse.
Synthèse segmentaire : Les peptides trop polymérisés sont coupés en plusieurs segments et synthétisés séparément, puis reconnectés à la fin.
Optimisation des conditions de purification : haute température, pH acide, ajout de solvants organiques pour trouver des conditions qui le rendent non-polymérisant.

4. Combinaisons de modificateurs complexes : conditions sans combats
Certains peptides ont de multiples exigences : phosphorylation, marquage fluorescent et cyclisation. Ces modifications peuvent entrer en conflit les unes avec les autres - par exemple, la phosphorylation est phobique aux acides-, le marquage fluorescent est phobique à la lumière- et la cyclisation nécessite un pH spécifique.
Notre approche :
Conception d’une stratégie de conservation : quelle taille effectuer en premier, quelle taille faire plus tard, conçue à l’avance.
Conditions orthogonales : Les conditions de chaque étape de la réaction n'affectent pas les modifications déjà apportées.
QC intermédiaire : après chaque étape de modification, prélevez un échantillon pour vous assurer qu'il est correctement effectué avant de passer à autre chose.

5. Pureté : selon ce que vous en faites

Chaque peptide est accompagné d'un rapport HPLC et MS, rendant les données de pureté transparentes.

1. Nous faisons cela depuis 20 ans
La synthèse peptidique difficile n’est pas quelque chose que n’importe qui peut faire. Au fil des années, nous avons manipulé de nombreux peptides difficiles : protéines transmembranaires, peptides de fusion virale, conotoxines, protéines amyloïdes, peptides antimicrobiens, etc. Nous avons une bonne idée des séquences sujettes à problèmes et des conditions capables de les sauver. Au moins, vous n'êtes pas obligé de les essayer tous si vous venez chez nous pour une synthèse peptidique difficile et hydrophobe.

2. Ce n’est pas « essayer », c’est « avoir un programme ».
De nombreuses entreprises s'attaquent à des peptides difficiles et disent : « Nous allons l'essayer, mais nous ne le garantissons pas ». Nous ne jouons pas de cette façon. Avant d'accepter une commande, nous évaluerons la séquence, quelle est la proportion d'acides aminés hydrophobes, s'il existe une tendance à l'agrégation connue, combien de paires de liaisons disulfure et si la modification est complexe ou non. Après évaluation, nous vous dirons : quel est le taux de réussite et quelle est la durée du cycle.

Nous n'acceptons pas les commandes qui ne peuvent pas être exécutées et nous devons remettre les commandes que nous avons prises.

3. Systèmes de solvants spécialisés pour l’hydrophobie
Le peptide hydrophobe est notre point fort. Si le solvant conventionnel ne peut pas être dissous, nous changerons le solvant ; si la température conventionnelle ne réagit pas, nous ajusterons la température ; si la résine classique ne tient pas, nous changerons de résine. Il existe également l'étiquette solubilisante comme solution de rechange.

4. Plusieurs paires de liaisons disulfure, étape-par-étape
S'il y a plus de trois paires de liaisons disulfure, nous adopterons une approche-par-étape : la première étape consiste à protéger A et à ouvrir la première paire ; protéger B et ouvrir la deuxième paire ; protégez C et ouvrez la troisième paire. Après chaque étape, nous prélevons des échantillons pour MS et confirmons l’appairage avant de passer à autre chose. Enfin, le MS/MS sera cassé et vérifié, et les données vous seront fournies sans que vous les deviniez.

5. Contrôle qualité : des données à chaque étape
Le contrôle qualité des peptides difficiles doit être plus prudent :
CQ intermédiaire : Après chaque fragment et chaque étape de modification, mesurez d’abord la pureté et le poids moléculaire.
Produit final : HPLC pour la pureté, MS pour le poids moléculaire.
Test de solubilité : fournissez les solvants et les méthodes de solubilisation recommandés, afin de ne pas obtenir de peptides qui ne se dissolvent pas.
Lors d'une synthèse peptidique difficile et hydrophobe, les données parlent d'elles-mêmes, chaque étape peut être retracée.

• Forme de livraison : poudre lyophilisée, tubes à centrifuger ou flacons.
• Documents d'accompagnement : COA (profil HPLC + spectre MS), rapport de synthèse (facultatif).
• Tests facultatifs : teneur en peptides, endotoxines, humidité, composition en acides aminés, test de solubilité.
• Emballage sur mesure : portionnement et marquage selon vos exigences.
• Chaque produit de synthèse peptidique difficile et hydrophobe est examiné pour garantir que la séquence est correcte et que la pureté est conforme aux normes avant d'être envoyée.

Que vous ayez été rejeté par d'autres ou que vous ne puissiez pas le faire dans votre propre laboratoire, vous pouvez nous en parler. Si vous recherchez Science-Peptide pour effectuer une synthèse peptidique difficile et hydrophobe, au moins vous n'êtes pas obligé d'essayer un par un.

J'ai besoin que tu me dises :
Séquence peptidique (ou informations cibles)
Est-ce que quelqu'un d'autre l'a déjà fait ? Quel est le résultat ?
Combien (milligrammes)
exigences de pureté

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