Synthèse peptidique longue (jusqu'à 189 acides aminés)

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Besoin d’un long peptide contenant plus de 50 acides aminés ? Science-Le service de synthèse de peptides longs de Peptide couvre 50 à 189 acides aminés, avec une stratégie de synthèse segmentée, surmontant les problèmes d'agrégation hydrophobe et de faible efficacité de synthèse, etc.. 20 années d'expérience et de livraison stable. Bienvenue à nous contacter.

Pourquoi les peptides longs sont-ils difficiles à fabriquer ?
Quiconque a fait de la synthèse peptidique sait que le problème se pose lorsque la chaîne peptidique est longue : dans la limite de 20 acides aminés, la plupart des entreprises peuvent le faire. Lorsqu’il s’agit de plus de 40 acides aminés, nous commençons par choisir la séquence. À partir de 60 acides aminés, le nombre d’entreprises pouvant prendre le relais est réduit de moitié. Lorsqu’il s’agit de plus de 100 acides aminés, peu d’entreprises osent le faire.

 

Pourquoi? Car la Synthèse Peptide Longue se heurte à plusieurs écueils :

L'efficacité de la synthèse diminue : à chaque extension d'un acide aminé, le rendement sera réduit d'une fois. 30 peptide d'acide aminé, à chaque étape d'un rendement de 99 %, le rendement final est toujours de 74 % ; 60 acides aminés, chaque étape est toujours de 99%, le rendement final n'est que de 55%. En fait, le rendement de nombreuses étapes ne peut pas atteindre 99 %.
Agrégation hydrophobe : Lorsqu'il y a beaucoup d'acides aminés hydrophobes dans un long peptide, la chaîne peptidique commence à « s'agglutiner » sur la résine et les acides aminés situés derrière elle ne peuvent pas entrer.

Difficulté de purification : les temps de rétention des peptides longs et des impuretés sont trop proches les uns des autres pour une coupe nette.
Mauvaise solubilité : Lorsque le peptide est obtenu, il ne peut pas être dissous, donc l’expérience ne peut pas être réalisée.
Nous avons déjà été dans ces nids-de-poule et nous savons comment les contourner.

1. Longueur : 50-189 acides aminés

2. Stratégie de synthèse segmentée
Le moyen le plus efficace de traiter les peptides longs est de les segmenter :
Sélection des segments : coupez le long peptide en 2 à 4 segments de 30 à 60 acides aminés chacun. Le point de coupure doit être situé à la position où la difficulté de synthèse est faible, par exemple en évitant la région hydrophobe continue.
Synthèse de fragments : Chaque fragment est synthétisé et purifié individuellement jusqu'à une pureté suffisamment élevée.
Épissage de fragments : assemblage de fragments entre eux en solution ou sur une résine. La méthode d’assemblage peut être soit chimique naturelle, soit enzymatique.
Pliage : si le peptide a une liaison disulfure, il doit être plié dans la conformation correcte après l'épissage.

3. Pureté : en fonction des exigences expérimentales

Chaque peptide long est accompagné d'un rapport HPLC et MS, rendant les données de pureté transparentes.

4. Modifications : les peptides longs peuvent également ajouter des fonctions
Marquage fluorescent : FITC, TAMRA, veulent voir où passe le long peptide.
Biotine : faites un pull-ou testez.
Marquage isotopique : pour la quantification RMN ou spectrométrie de masse.
Phosphorylation/glycosylation : imitant les modifications post-traductionnelles.

1. Nous faisons cela depuis 20 ans
La synthèse peptidique longue n’est pas quelque chose que tout le monde peut faire. Au fil des années, nous avons manipulé de nombreux peptides longs : fragments de protéines transmembranaires, peptides de fusion virale, protéines amyloïdes, peptides antimicrobiens, etc. Nous avons une bonne idée des séquences faciles à agréger et des conditions qui peuvent les sauver. Si vous venez chez nous pour la synthèse de peptides longs, au moins vous n'aurez pas à marcher sur la fosse dès le début.

2. Synthèse fractionnée : pas seulement couper en morceaux
La segmentation semble simple, mais où couper, combien de temps dure chaque segment et comment les connecter sont tous importants. Nous avons plusieurs principes :
Couper dans la zone hydrophile : Eviter de couper dans le noyau hydrophobe, sinon les segments se rassembleront d'eux-mêmes.
Équilibrez la longueur des fragments : ne rendez pas un segment particulièrement difficile à réaliser et d'autres segments particulièrement faciles.. 3.
Sélection du point de connexion : les connexions chimiques naturelles nécessitent un thioester au terminal C- et du Cys au terminal N-, qui doivent être conçus à l'avance.

3. Peptides hydrophobes : système solvant spécial.
Certains peptides longs sont si hydrophobes qu'ils ne peuvent pas être dissous par les solvants conventionnels, ils seront donc agglutinés sur la résine lors de leur synthèse. Nous disposons d'un système de solvants spécial et d'additifs pour maintenir l'étirement de la chaîne peptidique pendant le processus de synthèse, afin que les acides aminés suivants puissent entrer.

4. Contrôle qualité : des données à chaque étape
Le contrôle qualité des peptides longs est plus complexe que celui des peptides courts :
Contrôle qualité des intermédiaires : après avoir synthétisé chaque fragment, mesurez d'abord la pureté et le poids moléculaire, puis passez à l'étape suivante après avoir réussi le test.
Surveillance du processus d'épissage : échantillonnez la réaction de connexion et mesurez le MS pour voir l'efficacité de la connexion.
Inspection du produit final : HPLC pour la pureté, MS pour le poids moléculaire, MS/MS pour l'exactitude de la séquence (facultatif).
Test de solubilité : fournissez les solvants et les méthodes de solubilisation recommandés, afin de ne pas obtenir de peptides qui ne se dissolvent pas.
Lors de la synthèse peptidique longue, les données parlent d'elles-mêmes et chaque étape est traçable.

5. Des milligrammes aux centaines de milligrammes, jusqu'à la fin
Milligrammes pour la phase de criblage, dix milligrammes pour la phase de validation, cent milligrammes pour l'étude structurelle - nous pouvons tout prendre. Le même projet, la même contrepartie, pas besoin de ré-harmoniser.

• Livraison : Poudre lyophilisée, tubes ou flacons à centrifuger, protégés par de l'azote.
• Documents d'accompagnement : COA (profil HPLC + profil MS), MS/MS (confirmation de séquence en option), rapport de synthèse (processus de segmentation et d'épissage).
• Tests facultatifs : teneur en peptides, endotoxines, humidité, composition en acides aminés, test de solubilité.
• Emballage sur mesure : portionnement et marquage selon vos exigences.
• Chaque produit de synthèse peptidique longue est-vérifié deux fois pour garantir que la séquence est correcte et que la pureté est conforme aux normes avant d'être envoyée.

Que vous souhaitiez un peptide transmembranaire de 80aa ou une protéine virale de 150aa, vous pouvez nous en parler. Si vous demandez à Science-Peptide de faire la synthèse de peptides longs, au moins vous n'êtes pas obligé d'essayer un par un.

J'ai besoin que tu me dises :
Séquence peptidique (ou informations cibles)
Combien (milligrammes)
exigences de pureté
n'ont pas de liaisons disulfure ou d'autres modifications

Quand le veux-tu ?

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