Impuretés du tirzépatide

Impuretés du tirzépatide|Contrôle des impuretés tilpeptide|Synthèse personnalisée d'impuretés et confirmation de la structure|Science-Peptide

Contrôle des impuretés du tirzépatide - pour la recherche sur la qualité des médicaments à double cible GLP-1/GIP-, rapports sur les médicaments génériques. Science-Peptide fournit une synthèse personnalisée des impuretés liées au tilpeptide, y compris les peptides de délétion, les impuretés oxydées, les produits d'exfoliation des acides gras, les dimères, etc., avec des données de confirmation structurelle pour soutenir votre étude de spectroscopie des impuretés avec confirmation structurelle données. Bienvenue à nous contacter.

Le Tirzepatide (Tirzepatide) est le double agoniste GLP-1/GIP mis au point par Eli Lilly, et il bat son plein ces deux années. Il a un bon effet de réduction du sucre et un fort effet de réduction du poids, et est appelé la version améliorée du « médicament miracle pour perdre du poids ». Beaucoup de fabricants nationaux de médicaments génériques peptidiques s'y intéressent - après l'expiration du brevet, qui pourra d'abord évaluer la qualité de la recherche, qui aura la possibilité de s'emparer du premier générique.

 

Cependant, la qualité du tilpeptide n’est pas si simple à étudier. Il est plus complexe que la siméthicone, avec 39 acides aminés, une chaîne latérale d'acide gras (acide eicosanedioïque) et un lieur. Les impuretés pouvant apparaître lors du processus de synthèse sont bien plus élevées que celles des peptides ordinaires. Les peptides manquants, les impuretés oxydatives, les produits d'excrétion d'acides gras, les dimères, les impuretés liées au lieur- doivent chacun avoir un contrôle, chacun doit être clair.

 

Nous avons accumulé beaucoup d'expérience dans la synthèse d'impuretés peptidiques complexes. Nous nous sommes spécialisés dans l'étude du tilpeptide, et nous savons quelles sont les difficultés liées à son profil d'impuretés et quels sont les éléments de contrôle essentiels. Nous pouvons personnaliser la synthèse de divers contrôles d'impuretés tilpeptides en fonction de vos besoins, avec des données de confirmation de structure, et vous aider à établir la méthode afin que vous soyez moins susceptible de recevoir un supplément lors du dépôt.

La structure moléculaire du tilpeptide détermine que son profil d'impuretés est beaucoup plus complexe que celui des peptides généraux. Lorsque nous effectuons des études d’impuretés, nous nous concentrons principalement sur ces catégories :

Peptide manquant
Les 39 acides aminés, dont l’un quelconque est manqué lors du processus de synthèse, constituent une impureté. Les temps de rétention des peptides manquants sur HPLC étaient largement distribués, avec différentes polarités des peptides manquants dans différentes positions. Certains manquent à l'extrémité N-, d'autres au milieu et d'autres près du site de fixation des acides gras. Nous avons reçu une commande d'un client portant sur 15 peptides manquants dans différentes positions afin de localiser toutes les impuretés manquantes possibles dans son processus.

Impuretés oxydantes
Le tilpeptide rencontré dans la séquence est sensible à l'oxydation en sulfoxyde puis en sulfone. Les impuretés oxydées apparaissent souvent dans les études de stabilité et se développent après un certain temps. Nous avons fait une comparaison, dans des conditions accélérées pendant un mois, le pic d'oxydation peut croître jusqu'à plus de 0,3%, sans contrôle.

Produits d'élimination des acides gras
Il s'agit d'une impureté propre au tilpeptide. Sa chaîne latérale d'acide gras (acide eicosanedioïque) est attachée à la lysine via un lieur, et cette modification peut être partiellement éliminée pendant la synthèse ou le stockage, ce qui permet à l'acide gras d'éliminer les impuretés. Plus problématique, l'excrétion peut se produire à différents endroits - entre l'acide gras et le lieur, ou entre le lieur et le peptide -, ce qui entraîne différentes impuretés. Nous avons synthétisé plusieurs impuretés liées aux acides gras-pour nos clients, allant de l'excrétion complète à une petite partie seulement.

Dimères/polymères
Deux ou plusieurs molécules tilpeptides se regroupent pour former un dimère ou plus. Le poids moléculaire du dimère est le double de celui du pic principal, et il s'agit souvent d'un pic large en HPLC, il doit donc être spécialement séparé et purifié avant de pouvoir être utilisé comme contrôle. Nous avons préparé des dimères et il a fallu plusieurs cycles de purification pour atteindre une pureté de plus de 95 %.

Impuretés liées au lieur-
La modification des acides gras du tilpeptide utilise un lieur (par exemple, -Glu, PEG, etc.), et ce lieur lui-même peut produire des réactions secondaires lors de la synthèse, générant des impuretés avec des lieurs manquants ou incomplets. Ce type d'impureté ne se trouve pas dans les peptides courants, mais est propre au tilpeptide, qui doit être étudié spécifiquement.

Impuretés désamidées
L'asparagine (Asn) et la glutamine (Gln) sont facilement désamidées dans des conditions acides ou thermiques, ce qui donne naissance à des isomères. Il y a plusieurs Asn et Gln dans la séquence du tilpeptide, et l'impureté de désamidation apparaît souvent dans le test de dégradation forcée, le produit témoin doit donc être utilisé pour localiser l'impureté.

Diastéréoisomères
Au cours de la synthèse à longue chaîne, les acides aminés individuels peuvent subir une racémisation, entraînant la formation de diastéréoisomères. La teneur de ce type d'impuretés n'est généralement pas élevée, mais les experts le demanderont lors de la déclaration, et il est préférable d'avoir un produit de contrôle pour confirmation.

Beaucoup de ces impuretés ne peuvent pas être achetées et doivent être synthétisées sur mesure. Nous avons réalisé de nombreux projets sur la personnalisation des impuretés tilpeptides, couvrant toutes les catégories ci-dessus.

La suppression de la série peptidique
We synthesize whatever is missing. For example, the lysine at position 20 is missing, or the amino acid near the fatty acid attachment site is missing. We will synthesize according to your process impurity profile, and the purity is usually >95 %, avec confirmation MS et RMN. Nous avons synthétisé un ensemble de peptides avec un espacement de 5 acides aminés du N-terminal au C-terminal.

Impuretés oxydantes
Met in Tilpeptide is oxidized to sulfoxide or sulfone, and we can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control product. We can control the oxidation conditions and synthesize the oxidized control. The purity is >95 % et nous pouvons fournir le spectre LC-MS pour confirmer le degré d'oxydation. Le sulfoxyde et la sulfone sont séparés par HPLC, et nous pouvons faire les deux.

Produits d'élimination des acides gras
C’est l’une des impuretés les plus difficiles à travailler dans le tilpeptide. La chaîne d'acide gras peut être complètement éteinte, ou elle peut l'être partiellement (par exemple, les derniers carbones sont manquants). On peut synthétiser une série de variantes pour différentes positions de la chaîne. Dans l'un des projets les plus compliqués que nous ayons réalisés, le client nous a demandé de synthétiser une impureté avec 8 carbones manquants dans la chaîne des acides gras, et il nous a fallu deux mois pour y parvenir.

Dimère
Les dimères formés par-réticulation ou interactions non-covalentes peuvent être préparés par différentes méthodes et isolés et purifiés pour fournir des contrôles de haute pureté. Les dimères sont laborieux à purifier, mais nous avons l'expérience pour savoir séparer les monomères.

Impuretés liées au lieur-
Le lieur (-Glu, PEG, etc.) peut être manquant ou incomplet, entraînant une série d'impuretés associées. Nous pouvons synthétiser diverses variantes avec des lieurs manquants, des lieurs raccourcis ou des lieurs incompatibles, et vous aider à constituer le spectre de ces impuretés.

Impuretés désamidées
Pour les sites Asn et Gln de la séquence, nous pouvons préparer des contrôles d'impuretés désamidées par dégradation forcée ou synthèse ciblée. La différence de poids moléculaire après désamidation n'est que de 1, ce qui n'est pas facile à distinguer par MS, nous utilisons donc généralement la RMN ou des conditions chromatographiques spéciales pour confirmer.

Autres impuretés personnalisées
Si vous trouvez une nouvelle impureté inconnue dans vos recherches, nous pouvons vous aider à analyser la structure et à la synthétiser. Envoyez-nous les échantillons, nous ferons une analyse LC-MS, en déduirons la structure, puis une synthèse directionnelle, puis comparerons le temps de rétention et le spectre de masse pour confirmer l'accord. Nous avons effectué ce processus à plusieurs reprises et le taux de réussite est assez élevé.

Développement et validation de méthodes analytiques
Lors de la mise en place d'une méthode HPLC ou LC-MS, un contrôle des impuretés est requis pour la localisation, la détermination de la séparation, la vérification de la plage linéaire et la récupération. Sans contrôle, il manque un élément à la validation de la méthode. De nombreux clients nous demandent d'abord de traiter quelques impuretés clés pour configurer la méthode, puis de composer lentement le reste.

Spectrométrie de masse hétérogène
Lorsqu'un médicament générique est déclaré, une analyse qualitative et quantitative complète des impuretés du processus et des produits de dégradation est requise. L'emplacement, le contenu et la structure de chaque impureté doivent être confirmés par un produit de contrôle. Nous avons vu que la déclaration des informations a été envoyée à remplir, neuf fois sur dix c'est les impuretés de cette pièce que nous n'avons pas compris.

Etudes de stabilité
Dans les tests de stabilité à long terme et les tests accélérés, il est nécessaire de déterminer quels produits de dégradation sont dominants et quelle est la tendance du contenu. Grâce au contrôle des impuretés, nous pouvons quantifier et surveiller avec précision. Un client effectuait la stabilité d'une préparation de tilpeptide et a constaté qu'un pic de dégradation augmentait très rapidement dans des conditions accélérées. Nous l'avons donc analysé et synthétisé par MS pour confirmer la structure, puis le client a été soulagé de le signaler.

Tests de libération par lots
Après la commercialisation, chaque lot d’API ou de formulation doit être testé pour la substance en question. Les contrôles d’impuretés sont des outils essentiels pour les tests de version.

Informations sur les déclarations de médicaments génériques
Les études d’impuretés constituent une section clé des informations de dépôt. Fournir des données complètes de profilage et de contrôle des impuretés réduit considérablement le risque d’une publication pour examen.

Cas 1 : une société pharmaceutique, programme de médicaments génériques tilpeptide
Ils développent une version générique du tilpeptide et ont besoin d'un ensemble complet de contrôles d'impuretés pour la validation de la méthode. Nous avons personnalisé 12 impuretés pour eux : 5 peptides manquants, 2 impuretés oxydées, 1 dimère, 2 produits d'excrétion d'acides gras et 2 impuretés liées au lieur-. Chacun d’eux a une pureté supérieure à 95 % et est accompagné de données MS et RMN. Le chef du projet a déclaré : « Les impuretés du tilpeptide sont deux fois plus nombreuses que celles des autres peptides, mais vous pouvez toutes les fabriquer et les données sont complètes, ce qui nous évite beaucoup de travail. Plus tard, la validation de leur méthode s'est achevée avec succès et ils se préparent désormais à la déclaration.

Cas 2 : Une entreprise CRO, profilage des impuretés
Ils ont entrepris un projet de recherche de qualité sur le tilpeptide, qui nécessitait une analyse complète des impuretés du procédé. Ils nous ont envoyé les échantillons bruts de peptides et nous avons effectué une analyse LC-MS, déduit les structures possibles de plusieurs impuretés inconnues, puis les avons synthétisées de manière ciblée, comparé les temps de rétention et les spectres de masse, et confirmé quatre nouvelles impuretés -, deux d'entre elles étaient liées au lieur- et deux d'entre elles étaient des variantes de l'excrétion d'acides gras. Le client a utilisé ces données pour affiner les profils d'impuretés et a réussi à obtenir son acceptation.

Cas 3 : Etudes de stabilité, une entreprise de biotechnologie
Ils examinaient la stabilité d'une formulation de tilpeptide et ont découvert que la quantité d'un produit de dégradation augmentait rapidement dans des conditions accélérées, mais ils ne savaient pas de quoi il s'agissait. Nous avons analysé l'échantillon par LC-MS et avons supposé qu'il s'agissait d'une impureté de désamidation sur un certain site Asn, puis nous l'avons synthétisé de manière ciblée et l'avons confirmé par comparaison. Ils ont établi un test utilisant ce contrôle et ont surveillé avec précision la tendance du produit de dégradation. Plus tard, lors de la soumission du rapport, cette partie des données a été soulignée par les experts et, en raison de la solidité des données, aucune compensation n'a été accordée.

Le tilpeptide est un produit populaire, mais l'étude des impuretés est une tâche délicate, en particulier les produits d'exfoliation des acides gras et les impuretés liées aux lieurs-, que de nombreux fabricants ne peuvent pas gérer. Si vous effectuez des recherches de qualité ou un développement générique de tilpeptide et avez besoin de contrôles d'impuretés, n'hésitez pas à nous contacter. Nous avons fait beaucoup de travail, nous connaissons les difficultés et nous savons comment les surmonter.